Стратегия борьбы с пандемией инфекции COVID-19 напрямую зависит от качества лабораторных методов исследования, а «золотым стандартом» диагностики COVID-19 были и остаются анализы на основе метода полимеразной цепной реакции с обратной транскриптазой (rRT-PCR или ОТ-ПЦР), позволяющие в реальном режиме времени определять компоненты РНК коронавируса [1,2].
К сожалению, ОТ-ПЦР требует наличия специализированной лаборатории и дорогостоящего оборудования. Но метод петлевой изотермальной амплификации (LAMP), также применяемый для детекции вирусной РНК, не требует лаборатории и может выполняться в формате «у постели больного». Иммуноферментный анализ (ИФА) позволяет определять вирус-специфические антитела, однако и этот метод требует лабораторного оборудования. А вот экспресс-тесты на основе метода иммунохроматографии на твердофазном носителе могут ответить на вопрос наличия иммуноглобулинов в течение 10-15 минут [3].
Сегодня молекулярная диагностика использует такие методы, как петлевая изотермическая амплификация с обратной транскрипцией (ОТ-LAMP) и амплификация рекомбинантной полимеразы обратной транскрипции (ОТ-PRA), а также технологии редактирования генома CRISPR/Cas для создания высоко-чувствительных тест-систем для детекции РНК коронавируса SARS-CoV-2 на основе методик DETECTR и SHERLOCK [4-6].
С целью определения степени тяжести больного и формирования исходов заболевания, в клинике исследуют уровни С-реактивного белка (СРБ) и прокальцитонина, изучают биомаркеры свертывания крови - активированного частичного тромбопластинового времени, протромбинового индекса, фибриногена, а также D-димера, повышенные титры которого являются плохим прогностическим критерием, связанным с тяжелыми осложнениями и даже гибелью пациента [8,9].
Важным лабораторным показателем является детекция уровня воспалительных цитокинов, таких как GCSF, IL-2, MCP1, IL-6, IL-7, IL-10, MIP1A, IP10 и TNFα [10].
И наконец, самый главный анализ – оценка интерферонового статуса (ИФН-статус). Дефицит основного противовирусного белка-интерферона коррелирует с тяжестью патологического процесса при инфекции COVID-19: у пациентов в тяжелом и критическом состоянии снижена экспрессия генов, кодирующих интерфероны I типа, и соответственно, подавлен синтез интерферонов. Низкий уровень интерферона-ɑ (ИНФ-α) в плазме крови ученые рассматривают как маркер, указывающий на риск развития критического состояния [11].
Таким образом, снижение продукции ИНФ-α говорит о дефектности системы интерферона и является показанием для ИФН-стимулирующей терапии, а оценка показателей ИФН-статуса позволяют судить об иммунореактивности организма в целом (12-16).
Безусловно, приведённые здесь методы лабораторной диагностики COVID-19 не являются исчерпывающими, в каждом конкретном случае спектр анализов может быть существенно расширен.
## СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
1. Амвросьева Т., Поклонская Н. SARS‑CoV‑2: лабораторная диагностика // Наука и инновации. 2020. №7. С. 22–27.
https://doi.org/10.29235/1818‑9857‑2020‑7‑22‑27
2. Younes N., Al-Sadeq D.W., Al-Jighefee H. et al. Challenges in Laboratory Diagnosis of the Novel Coronavirus SARS-CoV-2 // Viruses. 2020 May 26;12(6):582. doi: 10.3390/v12060582;
3. Амвросьева Т., Поклонская Н. SARS‑CoV‑2: лабораторная диагностика // Наука и инновации. 2020. №7. С. 22–27.
https://doi.org/10.29235/1818‑9857‑2020‑7‑22‑27;
4. Lamb L.E., Bartolone S.N., Ward E., Chancellor M.B. Rapid Detection of Novel Coronavirus (COVID-19) by Reverse Transcription-Loop-Mediated Isothermal Amplification // medRxiv, 2020. doi:10.1101/2020.02.19.20 025155v1;
5. Hou T., Zeng W., Yang M., Chen W., Ren L., Ai J., Wu J., Liao Y., Gou X., Li Y., Wang X., Su H., Gu B., Wang J., XuT. Development and Evaluation of A CRISPRbased Diagnostic For 2019-novel Coronavirus // medRxiv 2020.02.22.20025460. doi:10.1101/2020.02.22.20025460;
6. Горбунов А.А., Сорокина Л.Е., Чегодарь Д.В., Кубышкин А.В., Фомочкина И.И. Диагностика COVID-19: современное состояние проблемы и перспективы в отрасли // Крымский журнал экспериментальной и клинической медицины. 2020, т. 10, № 2, С.69-77 doi: 10.37279/2224-6444-2020-10-2-69-77;
7. Бевова М.Р., Нетесов С.В., Аульченко Ю.С. Новая коронавирусная инфекция COVID-19 // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология 2020; (2): С.53–58 doi: 10.17116/molgen2020380215
8. Lippi G., Favaloro E.J. D-dimer is Associated with Severity of Coronavirus Disease 2019: A Pooled Analysis // Thromb Haemost 2020; (5): 876–8. doi: 10.1055 / s-0040–1709650;
9. Железнова А.Д., Буфетова А.М. Диагностика коронавирусной инфекции // Медицинское образование сегодня /2020; 3 (11). C.140-149, ISSN: 2686-7745;
10. Chen N., Zhou M., Dong X. et al. Epidemiological and clinical characteristics of 99 cases of 2019 novel coronavirus pneumonia in Wuhan, China: a descriptive study. // Lancet 2020; (10223): 507–13. doi: 10.1016 / S0140–6736(20)30211-7;
11. Hadjadj J. et al. // Impaired type I interferon activity and inflammatory responses in severe COVID-19 patients. // Science 13 Jul 2020: eabc6027; doi: 10.1126/science.abc6027
12. Валиев Т.Т. Клиническое применение интерферонов: современный взгляд на вопросы эффективности и безопасности. Обзор литературы. Педиатрия. //Consilium Medicum. 2020; 3: 95–104. doi: 10.26442/26586630.2020.3.200286;
13. Вавиленкова Ю.А. Современные представления о системе интерферона //Вестник Смоленской государственной медицинской академии, 2012, №2, С.74-82;
14. Подчерняева Н.С. Интерферонопатии I типа – новый класс заболеваний в практике педиатра и детского ревматолога. //Педиатрия. 2017; 96 (3), DOI: 10.24110/0031- 403X-2017-96-3-199-209;
15. Zhang Q. et al. // Inborn errors of type I IFN immunity in patients with lifethreatening COVID-19 // Science, published online 24 September 2020. DOI:10.1126/science.abd4570
16. Сафина А.И., Шарипова О.В., Лутфуллин И.Я., Наумова О.С., Даминова М.А. Современные возможности интерферонов в лечении детей с COVID-19 // Медицинский совет. 2021;(1):59–65. doi: 10.21518/2079-701X-2021-1-59-65.
Нет комментариев